Equipements
Choix des équipements
Nanosight NS300 – Malvern Panalytical
Le NanoSight NS300 permet une caractérisation physique en taille et en concentration d’une suspension de nano-objets. Les objets sont visibles par diffusion de lumière à partir d’une source laser (405 nm). La trajectoire des objets est enregistrée par une caméra CCD et leur rayon hydrodynamique est déduit à partir de l’équation de Stokes-Einstein relatif au mouvement Brownien d’objet en milieu purement visqueux. L’instrument est équipé d’un pousse seringue NanoSight et d’un assistant de chargement d’échantillons NanoSight.
Spécifications:
Longueur d’onde d’excitation: 405 nm,
Gamme de concentrations : 1 – 5*108 part/mL,
Gamme de tailles : vésicules extracellualires : 50 – 1000 nm, nanoparticules métalliques : jusqu’à 10 nm,
Vitesse de lecture : ~ 6 min / échantillon (avec un protocole de 5*60s)
Nombre de particules suivies : 250
https://www.malvernpanalytical.com/en/products/product-range/nanosight-range/nanosight-ns300
Pousse seringue NanoSight (échantillon unique)
NanoSight NS300 is equipped with a syringe pump (1mL syringe) allowing measurement to be done at constant flow rate therefore improving sample statistics.
Spécifications:
Volume optimal : 1000 µL
Assistant de chargement d’échantillons NanoSight (échantillons multiples)
L’assistant de chargement d’échantillons NanoSight est un échantillonneur automatique permettant le chargement de multiples échantillons (jusqu’à un maximum de 96).
Spécifications:
Support : plaque de 96 puits
Volume optimal : 1mL / puits
Vitesse de lecture (exemple): 16h pour 96 échantillons (avec un protocole de 5*60s)
VideoDrop - Myriade
Le VideoDrop est un instrument d’analyse de particules entre 80 et 500 nm permettant une caractérisation physique en taille. Les particules sont illuminées par une diode-laser (450 nm) et leur détection est basée sur de la microscopie optique interférométrique. Cette technique innovante permet de mesurer en temps réel la concentration et al taille de particules à partir d’une seule goutte d’échantillon (quelques µl). Le Videodrop détecte le motif d’interférences généré par la re-diffusion de la lumière par les particules. La concentration est déduite par rapport au nombre de particules comptées dans un volume fini connu, tandis que la taille des particules (rayon hydrodynamique médian) est estimée à partir de la trajectoire des particules due au mouvement Brownien à travers l’équation de Stokes-Einstein.
Spécifications:
Longueur d’onde d’excitation : 450 nm,
Volume optimal : 5-10 µL
Gamme de concentrations : 108 – 1010 part/mL,
Gamme de tailles : Vésicules extracellulaires : 80 – 500 nm, nanoparticules métalliques : jusqu’à 30 nm,
Vitesse de lecture : ~ 1 min / échantillon
Nombre de particules suivies : 100 - 500
ExoView R100 – NanoView
L’ExoView R100 est un instrument qui permet d’avoir une quantification relative ainsi que la taille de vésicules extracellulaires (VEs). Les VEs sont capturées sur une micropuce (commandée auprès de NanoView) fonctionnalisée par les anticorps CD9, CD63, CD81 (marqueurs d’EV) et IgG (contrôle négatif). Des puces fonctionnalisées avec d’autres anticorps peuvent être commandées sur demande. Les anticorps fluorescents pour la détection peuvent être choisis de façon à permettre des analyses de co-localisation jusqu’à 4 marqueurs. La couleur du canal, ainsi que les caractéristiques des filtres d’excitation et d’émission sont indiquées dans le tableau suivant :
| Specifications | ||||
| Couleur | Excitation | Emission | ||
| Blue (488) | 480 +/- 15 nm | 519 +/- 13 nm | ||
| Green (555) | 555 +/- 12.5 nm | 595 +/- 16.5 nm | ||
| Red (647) | 640 +/- 15 nm | 697 +/- 30 nm | ||
La détection des VEs est possible même en présence de contaminants comme des agrégats de protéines (la discrimination se fera par absence de liaison contaminant – anticorps capture sur la micropuce.
Le système permet aussi la mise en évidence de colocalisation avec des marqueurs membranaires ou cytolsolic (localisés à l’intérieur des VEs). Pour les marqueurs cytosoliques, une étape supplémentaire de perméabilisation des VEs sera réalisée avant l’addition de l’anticorps cytosolique fluorescent.
Ce système permet l’analyse de 9 puces par session de mesures (environ 10 min / puce).
Les puces peuvent être préparées dans votre laboratoire puis transportées pour la lecture à la plateforme IVETh.
https://www.nanoviewbio.com/products/exosome-detection/exoview-r100-automated-exosome-measurement
Nucleocounter® NC-200™ – Chemometec
Le NucleoCounter® NC-200™ est un système permettant la quantification automatisée et standardisée de cellules et leur viabilité. Les cellules sont chargées dans une cassette Via1-Cassette™ (commandée auprès du fournisseur Chemometec) contenant deux marqueurs fluorescents : l’acridine orange (AO) qui marque toutes les cellules en vert et le DAPI qui colore les cellules mortes en bleu. Le volume disponible dans la cassette est calibré de sorte à assurer une haute reproductibilité des quantifications. Un algorithme intégré permet d’acquérir et d’analyser des images fluorescentes des cellules, afin d’en déterminer leur taille et leur intensité.
En plus de l’analyse d’une suspesion de cellules (cellules adhérentes détachées ou cellules non-adhérentes), il est possible de caractériser des échantillons d’agrégats cellulaires ou de cellules sur micro-porteurs en utilisant un protocole avec une étape de lyse cellulaire. Ce protocole se fait en deux temps et nécessite 2 réactifs (commandés auprès du fournisseur Chemometec). Des adaptations du protocole peuvent être nécessaires au cas-par-cas.
Le software NucleoView™ contient un module permettant l’implémentation de dossier électonique, de signatures électroniques et de procédure de droits administratifs compatible avec les recommandations BPF.
Spécifications:
Gamme de détection : 5*104 – 5*106 Cellules/mL
Volume minimal : 100µl (volume de la cassette : 60µl)
Vitesse de lecture : 50s (protocole 1 cassette) – 120s (protocole 2 cassettes)
https://chemometec.com/products/nucleocounter-nc-200-automated-cell-counter/
Asymetrical flow field – flow fractionation (A4F) – Wyatt Technology
Eclipse™ module pour le fractionnement Asymmetrical flow field flow (A4F)
Eclipse™ module pour le fractionnement Asymmetrical flow field flow (A4F)
L’A4F est une méthode de séparation à gamme dynamique large, polyvalente et capable de fractionner aussi bien des biothérapeutiques tels que des particules virales, des liposomes, des nanoparticules, des émulsions, des protéines ou des vésicules extracellulaires. Elle s’effectue sans phase stationnaire et presque sans cisaillement appliqué à l’échantillon. Elle peut se faire dans le tampon d’origine de l’échantillon. Le système est piloté par une chaine Agilent Infinity II G7111B HPLC incluant un échantillonneur, un module UV-Vis, un module fluorescence, un collecteur de fraction et un thermostat.
Spécifications:
Canaux LC NEON® et Dispersion Neon®. Module DCM. Espaceur 125, 190, 250, 350 et 490 µm. Membrane PES ou RC, 10kDa.
Gamme de séparation : 2 – 800 nm
Gamme de débit : 0.1 – 8.3 ml/min
https://www.wyatt.com/products/instruments/eclipse-field-flow-fractionation-system.html
DAWN™ module for MALS (18 angles)
DAWN™ module for MALS (18 angles)
Le DAWN® est un détecteur de diffusion de la lumière multi angle pour la caractérisation absolue de la masse molaire et de la taille de biomolécules et de nanoparticules en solution. Combiné avec une séparation par la taille et une détection de la concentration, la détection MALS permet de déterminer la masse molaire et le rayon de gyration / géométrique des particules. Combiné avec d’autres méthodes de détection (A4F-MALS-DLS-UV-Fluo-RI), il est possible de relier la distribution de taille à d’autres paramètres (concentration, contenu, biomarqueurs, morphologie).
Spécifications:
Gamme de masse atomique : 200 Da – 1GDa
Gamme de rayon de gyration (Rg) : 10 – 500 nm (jusqu’à 1000 nm avec un modèle spécifique de forme)
Gamme de rayon hydrodynamique (Rh) : en mode flux : 0.5 – 300 nm ; en mode séquentiel (batch) : 0.5 – 1000 nm
Sensibilité : 10 ng / 100 kDA pour du polystyrène dans du THF ; 200 ng pour du BAS dans du PBS
Longueur d’onde laser : 658 nm +/- 4 nm
https://www.wyatt.com/products/instruments/dawn-multi-angle-light-scattering-detector.html
OPTILAB® Réfractomètre
OPTILAB® Réfractomètre
Indépendant de tout chromophore ou fluorophore, la détection par indice de réfraction différentiel est une Méthode alternative de détection de la concentration comme la spectrophotométrie UV-Visibile. Elle se fait dans tout type de solvant et est basée sur l’incrément d’indice de réfraction de l’échantillon plutôt qu’au coefficient d’extinction molaire à une longueur d’onde donnée. Cette méthode est souvent bien adaptée pour compléter une analyse MALS.
Spécifications:
Gamme (RIU) : -0.0047 to +0.0047
Bruit crête à crête (RIU) : 1 ± 7.5 x 10-10
Source optique : 660 nm
https://www.wyatt.com/products/instruments/optilab-refractive-index-detector.html
Microscope optique EVOS M5000 – ThermoFisher
Le système EVOS M5000 est un microscope à fluorescence (4 couleurs) par transmission. Ce système permet l’imagerie en fond clair, fond clair en couleur, par fluorescence ou par contraste de phase. Il possède des modes auto-focus, Z-stack et time-lapse.
La visualisation se fait sur un écran haute-résolution LCD 18.5” à travers une caméra monochrome CMOS 3.2 MP (2048 x 1536) associée à une résolution de 3.45 µm.
Le système d’illumination comprend un schéma RGB par DELs permettant l’acquisition d’images couleur de haute qualité / bas bruit en utilisant la même caméra CMOS capable de capturer en plus de la lumière transmise, trois canaux de fluorescence.
L’instrument est équipé d’une roulette de 5 objectifs ainsi que d’un condenseur 4 positions (anneaux 3 phases) permettant de l’imagerie en contraste de phase.
La platine est automatique et compatible avec l’observation de la plupart des types de supports / contenants incluant des lames, plaques multi-puits, flasque de culture, boîte de Pétri.
Spécifications:
Objectifs : 4X, 10X, 20X, 40X.
Anneaux pour le contraste de phase : 4X, 4X/10X, 20/40X
Formats de sortie : Monochrome RAW (16 bits) : TIFF, PNG ; Couleur (8 bits ) : TIFF, PNG, JPEG ; Films et stacks : AVI, WMV.
| Spécifications | ||||
| Filtres | Filtre d’excitation | Filtres d’émission | Fluorophores | Réf |
| DAPI | 357 nm | 447 nm | DAPI, Hoechst ™, BFP | AMEP 4950 |
| GFP | 482 nm | 524 nm | GFP, AlexaFluor™488, SYBR™, FITC | AMEP 4951 |
| TxRed | 585 nm | 628 nm | TexasRed™, AlexaFluor™568, AlexaFluor™594, MitoTracker™ Red, mCherry, Cy™3.5 | AMEP 4955 |
CellInsight - CX7-LZR - High content screening (HCS) – ThermoFisher
La plateforme CellInsight CX7 LZR est un système d’imagerie permettant l'analyse des images en parallèle de leur acquisition (criblage haut débit) de façon totalement automatisée grâce au software HCS Studio Cells Analysis capable d’analyser en temps réel pendant l’acquisition des images par un microscope confocal (spinning disk).
Spécifications:
Ce système possède de nombreuses spécifications techniques facilitant l’acquisition d’images à haut débit.
Caméra ultra-sensible : Photometrics™ X1 CCD cooled camera (2208*2208 px; 4,54 µm pixel size)
Objectifs (Olympus) : 4x, 10x, 20x, 40x; roulette automatisée pouvant accueillir jusqu’à 3 objectifs
Epi-illumination par 7 lasers : 405, 450, 488, 561, 594, 647 and 785 nm
Imagerie sur fond clair en couleur par 4 DELs : 447, 530, 590, 617 nm (mesures d’absorbance colorimétrique à partir de lames histologiques avec marqueurs standards)
Multiplexage jusqu’à 5 canaux (du proche UV au proche IR) : système de filtres d’émission dichroïque à 5 couleurs
Champ large et imagerie confocale : unité spinning disque CrEST™ équipée avec des pinholes de 40 μm et 70 μm
Autofocus: autofocus par laser (proche IR) ou par le software
Platine automatique équipée de différents supports : plaque multi-puits (jusqu’à 1536 puits), Boîte Pétri de 35 mm, lame de microscope et lame avec chambre multi-puits.
Imagerie sur cellules vivantes : incubateur intégré contrôlant la témpérature, l’humidité et le taux de CO2
Software : HCS Studio, un unique software pour l’acquisition et l’analyse des images développées spécifiquement pour le CX7-LZR. Il permet le contrôle total du processus d’acquisition des images ainsi que l’analyse des images (nombreux protocoles déjà implémentés), des analyses statistiques et de visualisation de données. Le software est capable d’analyser en temps réel pendant l’acquisition,
Lecteur de code-barre pour le suivi automatique des plaques
SAFe 360 – Abbelight
Le système SAFe 360 permet de la microscopie haute résolution aussi appelée nanoscopie basée sur de la microscopie unique de localisation de molécule fluorescente (SMLM).
Le système SAFe 360 commercialisé par Abbelight est monté sur un microscope Olympus IX83.
Ce système permet d’imager et de localiser précisément une molécule fluorescente avec une précision spatiale latérale (x et y) de 10 nm (au 100X). Grâce à une lentille astigmate, le système peut atteindre une précision spatiale (z) verticale de 15 nm (au 100X). Le champ de vue peut atteindre une surface de 150 x 150 mm2.
Le système permet des acquisitions multicolores simultanées soit en mode épi-fluorescence soit en mode microscopie à réflexion interne totale (TIRF) pour étudier des volumes très fins (proche de la lamelle, typiquement moins de 200 nm d’épaisseur). Il est aussi possible de réaliser du suivi de molécule florescente unique avec une précision de 10 nm à une fréquence d’images d’environ 20 msec/image.
Spécifications:
Longueurs d’onde d’excitation : 405 nm (100 mW), 488 nm (100 mW), 561 nm (100 mW) et 640 nm (500 mW).
Résolution spatiale (au 100X): 10 nm en x et y, 15 nm en z
Types d’échantillon : fixé ou vivant
Taille optimale de l’échantillon : 10 nm – 1 µm
Profondeur d’imagerie : jusqu’à 10 µm
https://www.abbelight.com/solutions/abbelight-instruments/#SAFe360
Raman microscope DXR3xi – ThermoFisher
Le DXR3xiTM Microscope Raman confocal permet d’imager du contenu biologique en utilisant un contraste moléculaire. Cette technique utilise un laser pour déclencher une interaction lumière/matière appelée la diffusion Raman. Ce phénomène de diffusion s’accompagne d’un décalage énergetique, de la lumière d’excitation, qui est spécifique aux niveaux vibrationnels de la molécule impliquée. En détectant ces photons Raman diffusés, il est possible de mesurer ces décalages énergétiques et s’en servir pour estimer la variation spatiale des proportions du mélange moléculaire contenu dans l’échantillon. Le DXR3xiTMinclut également un microscope en transmittance combinant les modes fond clair/champ foncé, avec la possibilité de passer de l’un à l’autre rapidement par simple action de manette.
Spécifications:
Objectifs : 10X, 20X, 50X (NA 0.75), 60X à immersion eau.
Platine motorisée : précision de positionnement de 50 nm
Longueurs d’onde d’excitation : 532 et 785 nm.
Résolution spatiale : ≈1 µm (au 50X)
Résolution spectrale : 5 cm-1 (2cm-1/pixel)
Plage spectrale : 50-3250 cm-1
Microscope standard
Mode d’illumination : champ clair / champ sombre
https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/IQLAADGABFFAHCMBDI